Versuch zum Zelltod einer Hefezelle.

1. Idee:

Bei diesem Versuch soll das Absterben der Zelle sichtbar gemacht werden. Als Indiz wird hierzu Methylenblau verwendet.

2. Aufbau und Durchführung:

Medium zum Zelltod

Bei diesem Versuch lag ein verfestigtest Agar-Agar Medium vor, welches mit einer Konzentration von 0,5 % Cyclohexemid versehen war.

Von diesem Medium wurde ca. 1 ml entnommen, mit 8 ml Nährmedium aus dem Zellvermehrungsversuch und 1 ml Methylenblaulösung durch Zufuhr von Wärme aufgelöst.

Die Zusammensetzung des Mediums sah folgendermaßen aus:

Glucose ca. 7,2%

Hefeextrakt 0,8%

Pepton 1,6%

Agar 2%

Cyclohexemid 0,05%

Methylenblau 10%

Die Präparation der Hefen auf dem Objektträger

Mit einer Eppendorf Pipette wird ca. 30 ul Nährmedium aus einem Reagenzglas auf ein Objektträger aufgebracht. Mit einer sterilen Impföse wird ein Tropfen aus einem durchgeschüttelten Gäransatz entnommen und mit dem Nährmedium vermischt. Dieses Medium wird mit einem Deckglas abgedeckt. Um eine möglichst geringe Schichtdicke zu erreichen wird mit Hilfe der Seite eines zweiten Objektträgers das Deckglas fest auf der Objektträger aufgedrückt. Überschüssiges Medium, welches auf der Seite austritt wird mit einem Papiertuch entfernt. Um anschließend eine Verdunstung und das daraus erfolgende Austrocknen des Mediums unter dem Deckglas zu verhindern, wird der Rand mit Glycerin abgedichtet.

Die Einstellung des Mikroskops

Der Objektträger wird nun auf den Objekttisch eingespannt. Die Lampe unter dem Mikroskop wird eingeschaltet und die Blende weit geöffnet. Mit Hilfe des kleinen Okulars sucht man nun einzeln stehende Hefezellen. Diese wird nach erfolgter Schärfeeinstellung mit dem nächst größeren Okular genau focussiert, bis das größte Okular diese Hefezelle scharf im Visier hat. Als zusätzliche Verstärkung der Auflösung wird noch ein Tropfen Immersionsöl zwischen dem Okular und dem Deckglas zugefügt.

Die Aufzeichnung des Zelltods

Eine auf dem Mikroskop sitzende Kamera liefert die Bilder an einen Videorecorder. Dieser nimmt nun den Vorgang auf.

Die Digitalisierung in den Computer

Über eine Video Karte wird ca. 1 mal pro Minute ein Bild aufgezeichnet. Diese Bilder werden in einer Animation zusammengefaßt.

3. Ergebnis:

Ca. 4 Stunden nach dem Ansetzen des Versuches trat dann der Vorgang zum Absterben der Zelle ein.

Zelltod von Saccharomyces cerevisiae

Der rote Kreis im rechten Bild zeigt die Größe der ursprünglichen Zelle.

Man erkennt sehr gut, wie die Zelle den Innendruck verliert und im weiterem Verlauf der Farbstoff in die Zelle hinein diffundieren kann.

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